蛋白质免疫印迹Western Blot
蛋白质免疫印迹(Western Blot)
▲ Western Blot原理示意图
Western Blot是一种用于分离和鉴定蛋白质的技术。。。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质,,,然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上,,再将膜与对应目标蛋白质的特异抗体一起孵育。。在洗膜过程中,,未结合的抗体被洗掉,,,只留下与目标蛋白质结合的抗体,,,最后通过显影胶片或荧光扫描来检测结合的抗体。。。由于抗体仅与目标蛋白质结合,,,,因此看到的带一般就是目的条带,,,条带的粗细对应于蛋白质量。。。通过分析特定反应的位置和强度,,,,可以获得目标蛋白在给定细胞或组织匀浆中的表达信息。。。。
由于凝胶电泳的高分辨率和免疫的强特异性和高灵敏度,,Western印迹分析可检测低至1ng的靶蛋白。。该方法广泛应用于分子生物学、、生物化学、、、、免疫遗传学等分子生物学领域。。。
①细胞或者组织总蛋白提取;
②蛋白质定量;
③SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳;
④蛋白质转膜(硝酸纤维素或 PVDF);
⑤膜的封闭;
⑥一抗、、二抗孵育;
⑦显影检测;
⑧数据分析,,,,交付结果。。。
①提供的细胞或者组织样品尽可能新鲜,,,,组织块大于100 mg;细胞大于6×106;
②说明样品上样顺序信息;
③客户需要自备一抗,,或者由本公司代购一抗;
④收到样品后7~10个工作日内向客户交付实验数据;
①团队经验丰富;
②交付周期短,,,提供原始图片以及试验记录,,,,保证数据真实可靠;
③本公司所用的电泳设备、、、一抗、、二抗、、、显影液和显影仪都是进口的,,,确保实验的高灵敏度以及高特异性;
④可以检测pg级别的低浓度蛋白。。